FAP-TATA，荧光素酶激活蛋白-TATA的合成步骤

FAP-TATA是一种通过化学或生物工程方法构建的融合蛋白分子，其设计理念是将成纤维细胞活化蛋白（Fibroblast Activation Protein, FAP）与TATA序列（TATA-binding peptide, TATA）偶联，通过荧光素酶激活蛋白（Fluorescent Activating Protein, FAP）功能，实现可控的荧光信号输出。该融合分子结合了FAP的靶向识别能力和TATA结构的调控特性，可用于靶向成纤维细胞检测、功能研究以及药物递送系统中的信号追踪。类似的LAO-TATA系统（Lactate Oxidase-TATA）也采用相同策略，将酶功能与TATA序列结合，实现特定化学信号与蛋白功能的整合。

FAP-TATA的合成步骤通常基于基因工程与化学偶联的结合策略，可分为重组蛋白表达和偶联修饰两大阶段。首先，通过分子克隆技术构建融合基因，将FAP编码序列与TATA序列融合在同一表达框架下，可加入荧光素酶激活蛋白片段以形成完整的功能蛋白。融合基因通常插入适当的质粒载体中，并在大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞系中表达。表达条件优化包括诱导温度、诱导剂浓度及培养时间，以确保蛋白折叠正确、功能完整且可溶。

在蛋白表达完成后，FAP-TATA蛋白通过亲和层析（如His-tag或Strep-tag亲和柱）进行初步纯化，去除宿主蛋白和其他杂质。随后通过透析或凝胶渗透色谱进一步纯化至高纯度，同时交换至反应缓冲液，以适应后续化学偶联或荧光素酶激活处理。

如果需要进行化学偶联增强功能（如荧光素标记或功能化纳米载体连接），可采用蛋白表面赖氨酸ε-氨基或半胱氨酸巯基与活化试剂反应。例如，NHS-酯活化的荧光素或马来酰亚胺活化试剂可与FAP-TATA蛋白表面官能团形成稳定的酰胺键或硫酰胺键。反应通常在pH 7–8的缓冲体系中进行，以保持蛋白质活性和结构完整性，同时控制摩尔比和反应时间，以避免多位点偶联导致功能受损。

偶联完成后，产物通过凝胶渗透色谱或透析去除游离试剂和副产物，并通过SDS-PAGE、Western Blot及质谱（MS）进行结构和分子量验证。荧光性能可通过荧光光谱或荧光酶活性实验检测，确保FAP功能完整且TATA调控序列正常发挥作用。LAO-TATA的合成步骤与FAP-TATA类似，只是将乳酸氧化酶替代FAP作为功能模块，通过相同的基因工程或化学偶联方法完成融合构建。

在整个合成过程中，需要注意几个关键点：一是保持蛋白质折叠和功能完整，避免高温、极端pH或有机溶剂造成结构破坏；二是控制偶联化学反应的位点和摩尔比，确保荧光素酶激活蛋白、FAP或LAO模块的功能不受干扰；三是通过多级纯化和表征步骤确保产物的高纯度和可重复性。

总体而言，FAP-TATA的合成路线整合了重组蛋白表达和化学偶联技术，通过基因融合获得蛋白骨架，再通过化学修饰增强功能，实现靶向识别、荧光信号调控及酶功能整合。该策略不仅适用于FAP-TATA，也可推广至LAO-TATA及其他功能蛋白-TATA融合体系，为生物标记、分子探针、药物递送和细胞信号追踪研究提供了可控、高效的分子构建方法。

产品名称：FAP-TATA

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09