产品名称:荧光素-赖氨酸-葡聚糖,FITC-lysine-dextran的合成路径与纯化
1. 核心结构与分子设计
三组分协同架构:
荧光素(FITC):异硫氰酸荧光素,通过异硫氰酸酯(-N=C=S)与赖氨酸氨基形成稳定硫脲键,赋予绿色荧光(激发波长490-495 nm,发射波长520 nm),量子产率0.4-0.6,适合多色成像(与蓝色/红色通道兼容)。
赖氨酸(Lysine):作为连接臂,其氨基与FITC反应,羧基与葡聚糖羟基偶联(通过EDC/NHS活化或环氧化物修饰),形成柔性连接臂,减少空间位阻,提升标记效率。
葡聚糖(Dextran):α-(1→6)主链+2%-5% α-(1→3)分支的多糖骨架,分子量可调(4 kDa至500 kDa),赋予水溶性、生物相容性及可降解性,延长体内循环时间。
2. 合成路径与纯化
合成步骤:
葡聚糖活化:通过羧基活化(如EDC/NHS)或碳二亚胺(CDI)处理,使羟基与赖氨酸氨基共价偶联,形成赖氨酸-葡聚糖偶联物。
FITC标记:在碱性条件(pH 8-9)下,FITC与赖氨酸氨基反应,通过透析或凝胶过滤(Sephadex G-25)去除未反应染料,最终冻干成粉末。
纯化方法:透析、凝胶过滤、超滤离心,确保纯度≥95%,分子量通过GPC验证。
3. 物理性质与溶解性
外观与形态:白色粉末或无色/淡黄色粘稠液体,高分子量(≥5 kDa)倾向半固体,玻璃化转变温度随分子量升高而增加。
溶解性:良好水溶性,溶于PBS、细胞培养液及生理盐水;可溶于DMSO、DMF等极性溶剂,不溶于正己烷等非极性溶剂。
稳定性:避光、-20℃冷冻保存,防止氧化/水解;FITC光稳定性好,但强光或高温(>60℃)可能降解。
4. 化学特性与反应活性
荧光特性:绿色荧光信号稳定,适合流式细胞术、共聚焦显微镜、活体成像;多色成像时与Cy3/Cy5等染料兼容。
生物相容性:葡聚糖的低免疫原性和可降解性,适合体内实验;赖氨酸的氨基提供偶联灵活性,支持蛋白质/抗体标记。
反应活性:赖氨酸氨基可与羧酸、活性酯(如NHS)进一步偶联,扩展功能化应用(如靶向配体、药物连接)。

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