产品名称：α-Bungarotoxin, CF®640R的光谱学与结构验证

1. 结构表征与偶联化学

核心结构分析

α-BTX为单链多肽，含13个半胱氨酸形成7对二硫键，维持其三维构象与受体结合能力。CF®640R通过NHS酯与α-BTX的赖氨酸ε-氨基或N端氨基反应，形成稳定酰胺键。偶联位点需避开受体结合位点（如Cys192-Cys193区域），避免影响活性。

连接子设计

可引入PEG链或可降解连接子（如二硫键），平衡荧光强度与生物活性。例如，PEG4-NHS酯可减少空间位阻，提升偶联效率。

2. 光谱学验证

UV-Vis吸收光谱

CF®640R的吸收峰应位于640±5 nm，偶联后α-BTX的吸收峰（280 nm）与染料吸收峰重叠，需通过差示光谱法扣除背景干扰。吸收系数比（A640/A280）可估算标记密度（通常1-5染料/蛋白质）。

荧光光谱

激发波长640 nm，发射波长660±10 nm，荧光强度与标记密度成正比。需验证荧光量子产率（如与标准染料Cy5对比）及光稳定性（持续照射下荧光衰减率）。

圆二色谱（CD）

监测α-BTX二级结构（如α-螺旋、β-折叠）是否因偶联改变。天然α-BTX在200-220 nm处有特征负峰，偶联后若结构破坏，CD谱图将显著偏移。

3. 结构验证技术

质谱（MS）

MALDI-TOF或ESI-MS测定偶联后分子量，确认染料成功连接。例如，天然α-BTX分子量约75 kDa，偶联后增加约1-5 kDa（取决于标记密度）。

核磁共振（NMR）

¹H/¹³C NMR分析化学位移变化，确认偶联位点及染料对蛋白质构象的影响。例如，赖氨酸ε-氨基的化学位移（δ≈2.9 ppm）在偶联后可能消失或偏移。

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）

SDS-PAGE显示偶联产物迁移率降低（如天然α-BTX在50 kDa附近，偶联后迁移至更高分子量区域）。荧光成像系统可直接观察染料标记条带。

分子筛层析（SEC）

分离游离染料与偶联产物，验证纯度（≥95%）。SEC柱（如Superose 6）可区分偶联产物与未反应蛋白质。

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