DBCO-FITC，异硫氰酸酯基团标记二本环辛炔点击化学的合成及纯化过程

DBCO-FITC是一种功能化分子，结合了Dibenzocyclooctyne（DBCO）基团和荧光分子FITC（Fluorescein Isothiocyanate）。DBCO基团广泛应用于点击化学反应（Click Chemistry）中，能够与其他含有活性基团（如氨基）的分子进行快速且特异性的反应。FITC是一种常用的荧光标记分子，具有强烈的绿色荧光，常用于生物成像、抗体标记和细胞追踪等领域。将DBCO与FITC结合，能够同时具备靶向性和荧光检测能力，广泛应用于细胞标记、分子成像、靶向药物递送和生物探针等研究领域。

合成过程

DBCO-FITC的合成主要包括两个关键部分：DBCO基团的引入和FITC分子的连接。该合成过程通常采用化学偶联方法，具体步骤如下：

1. 合成前准备

• 选择DBCO衍生物：通常，合成过程中使用带有DBCO基团的化学试剂，例如DBCO-氯乙酸酯或DBCO-氯甲基化合物。DBCO基团具有环状结构，能与含有氨基（-NH₂）等活性基团的分子发生点击化学反应，形成稳定的化学键。

• 准备FITC试剂：FITC（Fluorescein Isothiocyanate）是一种广泛用于荧光标记的化学试剂，通常以其异硫氰酸酯形式（FITC-NCS）存在，具有强烈的绿色荧光。FITC与DBCO的连接通常依赖于两者之间的化学反应。

2. DBCO与FITC的偶联反应

• 反应原理：FITC分子中的异硫氰酸酯基团（-N=C=S）具有很强的亲核性，可以与DBCO衍生物中的氨基（-NH₂）或其他活性基团发生反应，形成稳定的化学键。通常，FITC与DBCO基团之间通过氨基偶联反应进行结合，反应条件一般在温和的环境下进行。

• 反应条件：首先，将DBCO衍生物溶解于适当的溶剂（如二氯甲烷、DMF等）中，然后加入FITC溶液。反应可以在室温或稍高温度下进行，通常在反应完成后，加入适量的酸或溶剂来终止反应。为了提高反应的效率，有时会加入一定量的催化剂（如二乙胺、三乙胺等）。

3. 反应步骤

• 混合反应物：将FITC与DBCO衍生物按照一定的摩尔比（通常是1:1）混合，并在溶剂中搅拌。反应时间一般为4-24小时，具体时间依据反应温度和浓度而定。

• 监测反应进程：反应过程中，可以通过薄层色谱（TLC）或高效液相色谱（HPLC）监测反应进程，确保反应完全，且不会生成过多副产物。

4. 纯化过程
   合成后，DBCO-FITC需要通过纯化步骤去除未反应的原料和副产物。常见的纯化方法包括：

• 反相高效液相色谱（RP-HPLC）：HPLC是纯化DBCO-FITC的常用方法，通过反相色谱柱分离目标产物。选择适当的溶剂体系（如水-乙腈混合溶剂），通过调节梯度洗脱，可以有效分离目标产物与杂质。

• 透析：透析是去除小分子杂质（如溶剂、反应残余物）的有效方法。将反应后的溶液通过透析袋与外部溶液交换，去除小分子物质，得到纯净的DBCO-FITC产物。

5. 表征与分析
   纯化后的DBCO-FITC需要进行表征，确认其分子结构和纯度。常见的表征方法包括：

• 紫外-可见光谱（UV-Vis）：通过UV-Vis光谱可以确认FITC的特征吸收峰（约495 nm的吸收峰和约525 nm的发射峰）。这有助于确认FITC的成功偶联。

• 核磁共振（NMR）：通过^1H NMR和^13C NMR，可以验证DBCO基团和FITC的连接是否成功。DBCO的特征信号通常出现在约6.5-7.5 ppm，而FITC的信号则可以在较高的化学位移（如7-8 ppm）区域找到。

• 质谱（MS）：质谱可以用来确认合成产物的分子量，验证合成的DBCO-FITC是否符合预期。根据质谱结果，可以推测产物的分子量，进而验证分子结构。

• 荧光显微镜成像：由于FITC具有强烈的绿色荧光，荧光显微镜成像可以用于观察DBCO-FITC在细胞中的分布情况，进一步验证其应用性和稳定性。

产品名称：DBCO-FITC

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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