BCN- PEG2000- FITC，BCN-聚乙二醇-荧光素异硫氰酸酯偶联物，合成及纯化过程

英文名称：BCN-PEG2000-FITC

中文名称：BCN-聚乙二醇2000-荧光素异硫氰酸酯偶联物

二、结构组成

BCN-PEG2000-FITC由三部分组成：
（1）BCN（Bicyclo[6.1.0]nonyne，双环炔）为应变炔结构，可与叠氮基团通过应变促进的叠氮-炔环加成反应（SPAAC）形成稳定三唑环；
（2）PEG2000为分子量约2000 Da的聚乙二醇链段，提供良好的水溶性与空间柔性；
（3）FITC（Fluorescein Isothiocyanate，荧光素异硫氰酸酯）含有异硫氰酸酯活性基团，可与伯胺形成硫代脲键，并保持荧光性质。

该结构兼具点击反应活性与荧光示踪功能，适用于生物偶联与材料表面修饰。

三、合成过程

1. BCN-PEG2000中间体制备
   合成通常从氨基封端的PEG2000（NH₂-PEG2000-OH或NH₂-PEG2000-COOH）出发。将BCN-NHS酯溶解于无水DMF或DMSO中，在氮气保护条件下加入PEG前体和适量有机碱（如三乙胺）。反应温度控制在室温至35℃之间，搅拌6–12小时，使NHS酯与氨基发生酰胺化反应，生成BCN-PEG2000-NH₂。反应过程中需避免水分，以减少活性酯水解。

2. FITC偶联反应
   将上述BCN-PEG2000-NH₂溶解于pH 8.0–9.0的碳酸盐缓冲液或无水有机溶剂中，加入FITC溶液。异硫氰酸酯基团与伯胺发生亲核加成，生成稳定硫代脲结构。反应在避光条件下进行4–12小时。为保证偶联效率，通常采用轻微过量的FITC。

3. 反应控制要点

• 控制pH在弱碱性范围，提高氨基亲核性

• 避光操作，减少荧光基团分解

• 控制投料比例，降低交联或双端反应的发生

四、纯化过程

1. 透析去除小分子杂质
   反应结束后，将反应液转入分子量截断为3 kDa的透析袋，在去离子水中透析24–48小时，期间多次更换水，以去除游离FITC和低分子副产物。

2. 超滤浓缩
   使用超滤离心装置（MWCO 3 kDa）进一步去除残留小分子并浓缩产物。

3. 凝胶过滤层析（可选）
   如需更高纯度，可采用Sephadex G-25凝胶柱分离。目标产物通常先洗脱，而游离FITC滞后洗脱。

4. 冻干与保存
   纯化后溶液经冷冻干燥得到橙黄色粉末，储存于-20℃避光干燥环境。

五、结构表征

• ¹H NMR：确认PEG链、BCN环结构及FITC芳环信号

• MALDI-TOF质谱：验证分子量

• UV-Vis光谱：检测495 nm吸收峰

• 荧光光谱：检测约519 nm发射峰

六、总结

BCN-PEG2000-FITC通过酰胺键和硫代脲键将BCN、PEG2000和FITC连接形成三段式功能分子。其合成包括BCN-PEG中间体构建和FITC偶联两个步骤，纯化主要采用透析、超滤和凝胶层析方法。该分子具有良好的水溶性、点击反应活性及荧光示踪能力，可用于生物分子标记和材料功能化研究。

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

推荐产品：

FITC-D-Glu

FITC-D-Proline

FITC-D-脯氨酸

FITC-D-Pro

FITC-D-Phenylalanine

FITC-D-苯丙氨酸

FITC-D-Phe

FITC-D-Threonine

FITC-D-苏氨酸

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09