介绍量子点表面修饰抗体IgG、IgM、IgA、IgE、IgD抗体
免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是广泛存在于哺乳动物血清、淋巴液、组织液和外分泌液中的一种具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白,在机体防御疾病的重要成分在疾病研究、**研发、疫苗评价中具有重要作用。抗体(Antibody,Ab)是B细胞接受抗原刺激后分泌的具有免疫功能的,即能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。因此所有的抗体都是免疫球蛋白,而免疫球蛋白并不都是抗体。Ig分子由两条相同的轻链(L链)和两条相同的重链(H链)所组成,L链与H链由二硫键连接形成一个四肽链分子,称为Ig分子的单体,是构成免疫球蛋白分子的基本结构。根据H链恒定区结构的不同将免疫球蛋白分为五种:IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。
量子点表面修饰分子偶联服务
1、量子点表面修饰**小分子根据客户需求将油溶性或水溶性**分子负载到量子点表面,如阿霉素、紫杉醇等。
2、量子点表面修饰功能性小分子:
在已有在售产品的基础上,可根据客户需求将生物靶向性小分子,如RGD、叶酸等,偶联到量子点表面,构建靶向纳米探针。
3、量子点表面修饰抗体
在已有在售产品的基础上,可根据客户需求将生物靶向性抗体等蛋白分子,如美罗华单抗(针对CD20)、西妥昔单抗(针对EGFR)、曲妥珠单抗(针对HER2)等,偶联到量子点表面,构建靶向纳米探针。
2、量子点表面修饰糖类小分子:
3、在已有在售产品的基础上,可根据客户需求将糖类小分子,如半乳糖、葡萄糖等,偶联到量子点表面,构建靶向纳米探针。
针对目前量子点抗体偶联物纯化工艺复杂,回收率低,难以实现规模化生产的弊端,本**通过采用氨基葡萄糖封闭量子点与抗体偶联物的残留羧基,降低偶联产物的表面ζ电位,通过调整溶液pH值至4.5~5.0,进一步降低偶联产物在溶液中的净电荷含量、实现普通高速离心法规模化**纯化量子点与抗体偶联物。本**简化了量子点与抗体偶联物的实验操作流程,降低了对分离设备的要求,适合大批量纯化量子点IgG类单克隆抗体偶联物,得率在85%以上,且偶联产物的荧光特性以及生物活性未见明显变化
抗微生物纳米颗粒用于递送**剂或光响应性载体提供了抵抗传染病的新方法。在各种纳米颗粒中,荧光碳点由于独特的光学性能受到广泛关注。例如,荧光碳点可以作为大肠杆菌细菌成像的**荧光探针。两亲性荧光碳点和聚乙二醇修饰的荧光碳点在细菌检测和成像荧光标记方面也很有潜力。季铵盐和支化聚乙烯亚胺修饰的荧光碳点对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌都具有良好的抗菌活性
大量的单克隆抗体被成功制备,并被广泛应用于免疫学、生物化学、药理学、细胞生物学、微生物学及临床等各个领域。
因此,鼠源性IgG类单克隆抗体自然而然地成为了一类**且应用**广泛的单克隆抗体。该类抗体不仅具有重要的科研价值,而且具有巨大的商业价值。然而,鼠源性IgG类单克隆抗体不具有类似纳米材料的光、电等性质,因此在实际应用中往往需要结合其他的一些材料,如荧光物质、有机染料,磁性材料等。
量子点(Quantum Dots, QDs)是一种由I1-VI或II1-V族元素组成的半导体纳米晶体(Semiconductor nanocrystals),由于量子点的**物理尺寸,从而导致了一种量子限域效应,使得量子点显示出具有比常规有机染料、荧光蛋白更为优越的独特光学性质。**,与常规有机染料相比,量子点的激发光谱宽且呈连续分布,其荧光发射光谱的半宽峰高与常规有机染料相比更窄,且呈对称分布。此外,量子点与常规荧光染料相比,激发和发射光谱之间的斯托克斯位移大,降低了量子点荧光信号的信噪比,大大提高了量子点的检测灵敏度。单个量子点的荧光强度是罗丹明染料的10-100倍之间,且量子点的荧光发射波长可通过调整量子点合成粒径的大小以及材料组分进行连续调谐,因此合成不同直径大小的量子点就能获得多种可以辨别的不同颜色荧光。由于不同尺寸大小的量子点能够采用单一波长的激发光产生不同颜色的荧光,因而可方便实现对生物组分的多元检测。量子点与常规有机染料或荧光蛋白相比,具有较强的抗光漂白功能。量子点在连续光激发条件下,其荧光发射强度随时间变化不明显,而Alexa 488在没有添加抗漂白剂的情况下荧光强度呈指数下降。总之,作为一种新型的荧光标记物,量子点具有比常规有机染料以及荧光蛋白更为**的优势,目前已广泛应用于细胞标记、活体细胞成像、活体动物体内荧光显微成像以及荧光标记的免疫学快速诊断技术等领域。其中羧基功能团表面的水溶性量子点应用**广泛,采用多羧基以及疏水链的两性聚合物是油溶性量子点转化为羧基表面的水溶性量子点最常用方法。然而,量子点并不具有抗体分子的特异性和选择性,因此往往需要在其表面偶联上抗体分子形成量子点单克隆抗体偶联物。这样,这种偶联物就同时拥有了量子点的光学特性和抗体分子的特异性和选择性。
水溶性羧基化量子点与IgG类单克隆抗体常用偶联方法为EDC/NHSS介导的活泼酯方法。在水溶性羧基化量子点与IgG类单克隆抗体偶联过程中,将量子点IgG类单克隆抗体偶联物与溶液中游离IgG类单克隆抗体进行**分离,是保证量子点IgG类单克隆抗体偶联物广泛使用的前提。目前,量子点单克隆抗体偶联物纯化方法主要包括以下几种。
**,超速离心方法。由于·水溶性量子点纳米粒子粒径小,比表面积大,纳米材料与单克隆抗体偶联物表面含有大量的羧基,因此采用常规离心(低于30,000 g离心力),量子点单克隆抗体偶联物回收效率普遍偏低(小于50%),若要将量子点单克隆抗体偶联物回收效率提高至85%以上,离心速度一般需大于50,000 g。
**种,凝胶色谱法。该方法利用量子点单克隆抗体偶联物与单克隆抗体的分子量差异(表现为光学以及水化粒径的差异),利用排阻层析原理进行分离。
第三种,超滤分离法。该法利用超滤管的超滤膜截流分子量差异将单克隆抗体与量子点单克隆抗体偶联物进行分离的一种方法。同时还有基于琼脂糖凝胶以及琼脂糖-聚丙烯酰胺杂合凝胶电泳等的纯化分离方法。总之,利用以上纯化方法虽然可以获得较**的量子点单克隆抗体偶联物,但仍存在操作条件苛刻,流程复杂,得率低等缺陷,很难实现规模化生产。
水溶性量子点是一种良好的纳米荧光标记材料,该材料通过与单克隆抗体、链霉亲和素、蛋白A、蛋白G以及配体或受体分子偶联,可广泛应用于细胞标记、活体细胞成像、活体动物体内荧光显微成像以及免疫快速诊断等诸多领域。但是传统的量子点单克隆抗体偶联物纯化方法存在操作条件苛刻,流程复杂,得率低以及很难实现规模化生产等缺陷。
[0006]本**的目的是提供一种操作简便、分离效率高、大批量纯化水溶性量子点IgG类单克隆抗体的新方法,具体包括以下步骤:
纯化量子点与IgG类单克隆抗体偶联物的方法,包括如下步骤:
(I)将水溶性羧基修饰的量子点活化,加入IgG类单克隆抗体溶液,调整溶液pH至7.0~9.0后,偶联反应;
(2)偶联反应结束后,溶液中加入氨基葡萄糖封闭偶联产物中量子点表面残留的羧基,将反应溶液PH值调整至弱酸性;
(3)高速离心,弃上清液,取沉淀。
步骤(3)后,还有将沉淀用含25%甘油,0.01% NaN3的0.05 mol/L pH 7.0~7.5
磷酸盐缓冲液溶解步骤。
所用量子点为羧基化两亲聚合物修饰的水溶性羧基量子点。
所述步骤(1)中活化为将水溶性羧基修饰的量子点溶解于pH 5.0~6.0,0.05mol/L硼酸盐缓冲液中,分别加入1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺以及N-羟基硫代琥珀酰亚胺,37°C反应2小时,活化量子点羧基。
1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺以及N-羟基硫代琥珀酰亚胺与量子点的摩尔比均为100~200:1,优选为150:1 ;所述IgG类单克隆抗体与量子点的摩尔比为I~10:1 ;
偶联反应结束后,溶液中加入氨基葡萄糖至氨基葡萄糖终浓度为1.5~3%,充分混匀15~30分钟;
步骤(2)中将反应溶液pH值调整至弱酸性为将pH值调整至4.5~5.0,优选为4.5 ; 步骤(3)所述高速离心离心力为28,000~30,000g。
所述IgG类单克隆抗体为抗黄曲霉毒素BI单克隆抗体、抗赭曲霉毒素单克隆抗体、抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体、抗恩诺沙星单克隆抗体、抗盐酸克伦特罗单克隆抗体、抗沙丁胺醇单克隆抗体、抗孔雀石绿单克隆抗体、抗莱克多巴胺单克隆抗体、抗沙门氏菌单克隆抗体、抗志贺氏菌单克隆抗体、或抗空肠弯曲菌单克隆抗体。
量子点修饰人源化单克隆抗体
二硫化钼单层量子点溶液
产品名称
中文名称: MoS2单层量子点溶液
英文名称: Single layer MoS2 quantum dots
性质
浓度: 0.5 mg/ml
粒径:小于10nm
溶剂:水
稳定剂:氢氧化锂
PH: 8-9
制备方法
MoS2量子点由锂插层方法制备,制备后期离心去除大片径二硫化钼,量子点为主要成分,可能残留部分纳米片。插层法制备的量子点不发光,但是因为具有大量的缺陷和比表面积,是电化学应用的材料。
应用领域
传感检测、光电器件、医药领域、润滑添加剂等。
保存条件
二硫化钼量子点溶液请于4℃冷藏保存,需惰性气体保护,并于开封一周内用完。二硫化钼量子点粉末请于常温干燥避光密封保存。
制备二硫化钼量子点的方法包括机械剥离法(如研磨法)、化学合成法、化学气象层积、激光消融、电子束刻蚀方法等
制备步骤:
一种二硫化钼量子点的制备方法,包括以下步骤:(1)将二硫化钼粉末分散在无水乙醇中;向该溶液中加入氢氧化钠,氢氧化钠加入量为0.5-3mg/ml,超声混匀后得到混合溶液;(2)将步骤(1)所述混合溶液转移至反应釜中,密封,在100-200℃烘箱内反应3-24h,自然冷却至室温,过滤后收集所得滤液;(3)将步骤(2)所得滤液在透析袋中透析至中性,去除杂质小分子,干燥后即得到二硫化钼量子点,该二硫化钼量子点随着激发光波长的不同,二硫化钼量子点的发射光波长也不同,其中**激发波长为370nm,此时的**荧光发射波长为461nm,属于可见光范围。该操作简单,绿色环保,成本低,工艺条件易于实现,所制备的二硫化钼量子点具有优良的分散性、水溶性和强的荧光性。在光电子器件、锂离子电池、生物成像、光电催化等方面具有潜在的应用价值。但是反应过程中需要氢氧化钠可以同时作为一种腐蚀、插层、剥离试剂,在腐蚀大尺寸二硫化钼表面的同时,插入其层与层之间,得到小尺寸二硫化钼量子点。但是氢氧化钠对环境污染比较大,并且需要采用聚四氟乙烯内衬反应釜反应,不利于大规模生产,并且生产要求高。
温馨提示:西安齐岳生物科技有限公司供应的产品仅用于科研,不能用于人体和其他商业用途(ssl2021.11.11)
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