核苷酸糖转运体(NSTs)是ER和高尔基族的溶质载体35 (SLC35)家族成员，通过将腔内单磷酸核苷酸交换为胞质核苷酸糖，为糖基化提供底物。NSTs缺陷已被证实与先天性糖基化(CDG)疾病有关，然而，许多类型CDG的分子基础仍不明确。为了更好地理解NSTs的生物学特性，我们确定了udp -半乳糖转运体(SLC35A2)、udp - n -乙酰氨基葡萄糖转运体(SLC35A3)和一个孤儿核苷酸糖转运体SLC35A4的潜在相互作用伙伴。

为此，我们将每个SLC35A2-A4蛋白作为诱饵进行了四个独立的下拉实验，并用质谱技术鉴定了免疫沉淀物质。从获得的候选名单中，我们选择了一些使用纳米比特系统(一种基于荧光素的分离发光技术)在体外确认相互作用的候选名单。NSTs与两种atp酶(ATP2A2、ATP2C1)、高尔基pH调节因子B (GPR89B)和钙通道(TMCO1)相互作用，这可能反映了离子稳态对糖基化的调节作用，并与basigin (BSG)相互作用。

我们的发现为NST相互作用网络的发现提供了一个起点，以便更好地理解糖基化是如何被调节并与其他细胞过程相联系的。意义:尽管核苷酸糖转运体是蛋白质糖基化机制的关键组成部分，并且其缺乏活性是严重的代谢性疾病的基础，但这些必需蛋白质的生物学、功能和调节仍是谜。

在本研究中，我们通过识别一组新的潜在的相互作用伙伴，用于udp -半乳糖转运体(SLC35A2)、udp - n -乙酰氨基葡萄糖转运体(SLC35A3)和一个孤儿转运体SLC35A4，但其作用尚未确定。其中几个新的相互作用通过NanoBiT系统在体外得到证实，这是一种分裂荧光素酶互补实验。这项工作的意义还在于，它通过对4种不同的共免疫沉淀策略的详细比较，以及定制的样品制备和数据处理工作流程，解决了发现膜蛋白相互作用伙伴的总体挑战。

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