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KLH 偶联多肽定制技术(Keyhole Limpet Hemocyanin–Peptide Conjugation)
发布时间:2025-07-08     作者:zhn   分享到:

KLH 偶联多肽定制技术(Keyhole Limpet Hemocyanin–Peptide Conjugation)

1. 技术概述

KLH(钥孔鲍血蓝蛋白,Keyhole Limpet Hemocyanin)是一种高分子量、免疫原性很强的载体蛋白,广泛用于疫苗开发、抗体制备和免疫原增强研究中。由于其非哺乳动物来源、结构复杂、强大的免疫佐剂效果,KLH 被常用于与小分子多肽偶联形成高免疫原复合物,从而诱导体内强烈的免疫反应。


2. KLH 的类型

常见的KLH产品包括两种形式:

原生KLH(native KLH):大分子聚合体,适合用作疫苗或免疫佐剂。

分离KLH(subunit KLH):单体形式,分子量较低,更稳定,适用于实验室偶联反应。


3. 多肽-KLH 偶联原理

KLH本身含有大量赖氨酸残基(-NH₂),因此可通过如下几种化学方式与多肽偶联:

A. EDC/NHS酰胺键偶联

条件:多肽带有羧基,KLH含有氨基

工艺:EDC活化羧基 → NHS稳定中间体 → 与KLH反应形成酰胺键

B. 戊二醛交联

条件:多肽和KLH都带氨基

机理:形成 Schiff 碱结构,随后还原稳定

C. 马来酰亚胺/巯基桥接

条件:多肽含有半胱氨酸(-SH)

工艺:先将KLH通过马来酰化处理,再与多肽巯基偶联

D. 点击化学偶联

条件:多肽修饰叠氮或炔基,KLH接入对端官能团

特点:高效率、低副反应,适合高精度定向偶联


4. 定制流程

多肽序列合成:可添加C端或N端巯基、羧基、连接桥臂(如PEG)

选择偶联方式:根据结构和用途确定EDC/NHS、戊二醛或点击化学

偶联反应条件优化:

缓冲液:MES、PBS、Borate等

温度:常温或4°C

比例:一般多肽:KLH = 10:1~100:1

纯化与验证:

透析、离心过滤去除游离多肽

SDS-PAGE、电泳确认偶联成功

蛋白浓度检测与偶联效率分析


5. 应用方向

制备抗多肽抗体(常用作抗原)

肿瘤疫苗、抗体药物前体

自身免疫病模型诱导

佐剂增强疫苗开发(如HPV、肿瘤肽疫苗)

KLH 偶联多肽定制技术

产地:西安齐岳生物

用途:科研


关于我们:

西安齐岳生物科技有限公司专注于功能化玻片,脂质体,纳米材料,荧光材料,peg衍生物、磁珠微球、蛋白、多肽、氨基酸、小分子、生物素类试剂、共聚物及光电功能材料等各种科研材料的定制合成服务。

以上资料由齐岳生物小编zhn提供,仅用于科研

 

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