KLH 偶联多肽定制技术(Keyhole Limpet Hemocyanin–Peptide Conjugation)
1. 技术概述
KLH(钥孔鲍血蓝蛋白,Keyhole Limpet Hemocyanin)是一种高分子量、免疫原性很强的载体蛋白,广泛用于疫苗开发、抗体制备和免疫原增强研究中。由于其非哺乳动物来源、结构复杂、强大的免疫佐剂效果,KLH 被常用于与小分子多肽偶联形成高免疫原复合物,从而诱导体内强烈的免疫反应。
2. KLH 的类型
常见的KLH产品包括两种形式:
原生KLH(native KLH):大分子聚合体,适合用作疫苗或免疫佐剂。
分离KLH(subunit KLH):单体形式,分子量较低,更稳定,适用于实验室偶联反应。
3. 多肽-KLH 偶联原理
KLH本身含有大量赖氨酸残基(-NH₂),因此可通过如下几种化学方式与多肽偶联:
A. EDC/NHS酰胺键偶联
条件:多肽带有羧基,KLH含有氨基
工艺:EDC活化羧基 → NHS稳定中间体 → 与KLH反应形成酰胺键
B. 戊二醛交联
条件:多肽和KLH都带氨基
机理:形成 Schiff 碱结构,随后还原稳定
C. 马来酰亚胺/巯基桥接
条件:多肽含有半胱氨酸(-SH)
工艺:先将KLH通过马来酰化处理,再与多肽巯基偶联
D. 点击化学偶联
条件:多肽修饰叠氮或炔基,KLH接入对端官能团
特点:高效率、低副反应,适合高精度定向偶联
4. 定制流程
多肽序列合成:可添加C端或N端巯基、羧基、连接桥臂(如PEG)
选择偶联方式:根据结构和用途确定EDC/NHS、戊二醛或点击化学
偶联反应条件优化:
缓冲液:MES、PBS、Borate等
温度:常温或4°C
比例:一般多肽:KLH = 10:1~100:1
纯化与验证:
透析、离心过滤去除游离多肽
SDS-PAGE、电泳确认偶联成功
蛋白浓度检测与偶联效率分析
5. 应用方向
制备抗多肽抗体(常用作抗原)
肿瘤疫苗、抗体药物前体
自身免疫病模型诱导
佐剂增强疫苗开发(如HPV、肿瘤肽疫苗)
产地:西安齐岳生物
用途:科研
关于我们:
西安齐岳生物科技有限公司专注于功能化玻片,脂质体,纳米材料,荧光材料,peg衍生物、磁珠微球、蛋白、多肽、氨基酸、小分子、生物素类试剂、共聚物及光电功能材料等各种科研材料的定制合成服务。
以上资料由齐岳生物小编zhn提供,仅用于科研
相关推荐:
Methyltetrazine-PEG5-NHS;1802907-92-1
Methyltetrazine-Sulfo-NHS ester
Methyltetrazine-Sulfo-NHS;1821017-46-2
Tetrazine-Sulfo-NHS;CAS:1821017-48-4
Tetrazine-Sulfo-NHS Ester;四嗪-活性脂
CAS:1616668-55-3;Tetrazine NHS
Tetrazine-NHS Ester; CAS:1616668-55-3
5-羧基四甲基罗丹明 叠氮; 5-TAMRA azide
5-TAMRA Azide;1006592-61-5
Cy5 Azide;1782950-80-4;Cy5-N3
Fluorescein-Biotin-N3,荧光素-生物素-叠氮
Fluorescein-Biotin-Azide