荧光标记多肽底物定制技术

一、概述

荧光标记多肽底物是一类在蛋白酶活性检测、信号通路分析、细胞成像等方面应用广泛的功能化分子探针。通过在多肽链N端或C端共价连接荧光团，可用于FRET探针、酶切底物、细胞摄取评价等。

二、定制技术路线

1. 多肽合成（固相合成法）

采用Fmoc固相合成策略：

使用氨基树脂载体合成目标序列；

控制链长（5~30个氨基酸残基）；

高纯度（>95%）通过HPLC纯化；

特异性酶切位点设计（如DEVD、RRR等）。

2. 荧光修饰

常用荧光染料：

FITC（异硫氰酸荧光素）

Cy3/Cy5、FAM、TAMRA、Alexa Fluor 系列

可设计为FRET对（如FAM-TAMRA）

修饰位点选择：

N端氨基直接标记；

C端通过链接臂引入；

中间加入连接臂或降解位点（PEG linker、酶切位点）

3. 接头设计与双标记技术

使用Lys侧链氨基或Cys巯基引入荧光标记；

可构建酶响应型FRET结构，用于荧光开关探针；

连接肽段与多肽探针之间通过PEG链柔性连接。

三、定制参数与服务内容

四、应用方向

荧光成像探针：用于细胞摄取或定位研究；

酶活性检测：如Caspase-3、MMP活性评估；

FRET探针：用于蛋白交互研究；

信号转导路径研究：作为底物筛选工具。

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