荧光标记多肽底物定制技术
一、概述
荧光标记多肽底物是一类在蛋白酶活性检测、信号通路分析、细胞成像等方面应用广泛的功能化分子探针。通过在多肽链N端或C端共价连接荧光团,可用于FRET探针、酶切底物、细胞摄取评价等。
二、定制技术路线
1. 多肽合成(固相合成法)
采用Fmoc固相合成策略:
使用氨基树脂载体合成目标序列;
控制链长(5~30个氨基酸残基);
高纯度(>95%)通过HPLC纯化;
特异性酶切位点设计(如DEVD、RRR等)。
2. 荧光修饰
常用荧光染料:
FITC(异硫氰酸荧光素)
Cy3/Cy5、FAM、TAMRA、Alexa Fluor 系列
可设计为FRET对(如FAM-TAMRA)
修饰位点选择:
N端氨基直接标记;
C端通过链接臂引入;
中间加入连接臂或降解位点(PEG linker、酶切位点)
3. 接头设计与双标记技术
使用Lys侧链氨基或Cys巯基引入荧光标记;
可构建酶响应型FRET结构,用于荧光开关探针;
连接肽段与多肽探针之间通过PEG链柔性连接。
三、定制参数与服务内容
项目 | 说明 |
多肽长度 | 5–30 aa |
荧光染料 | FITC, TAMRA, Cy5, Alexa Fluor 等 |
修饰位点 | N端、C端、Lys侧链等 |
酶响应性 | 可设计为MMP、Caspase、Trypsin等识别底物 |
纯度标准 | >95%,MS鉴定/HPLC报告 |
交付形式 | 冻干粉/水溶液,带完整说明书 |
四、应用方向
荧光成像探针:用于细胞摄取或定位研究;
酶活性检测:如Caspase-3、MMP活性评估;
FRET探针:用于蛋白交互研究;
信号转导路径研究:作为底物筛选工具。
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