O-连N-乙酰氨基葡萄糖（O-GlcNAc）修饰技术

1. 技术背景

O-GlcNAc 为糖蛋白中常见的α-O-N-乙酰氨基葡萄糖修饰，用于研究蛋白质功能调控、信号转导、癌症与代谢疾病机制。可将O-GlcNAc定位于特定蛋白质构象或位置，以进行生化研究或靶向修饰。

2. 合成策略

化学羟基选择性乙酰化：将目标蛋白或寡肽的Ser/Thr上羟基与GlcNAc-OH耦合；

N-羧基活化法：利用GlcNAc-COOH活化为NHS酯，使其与蛋白羟基或胺基偶联；

酶促修饰：采用O-GlcNAc转移酶（OGT）在UDP-GlcNAc供体存在下进行酶催化作用。

3. 合成流程

合成GlcNAc-NHS

UDP-GlcNAc水解脱磷活化或化学合成形成GlcNAc-COOH，接着EDC/NHS活化；

蛋白偶联反应

在PBS缓冲下（pH 7.5–8.0），GlcNAc-NHS缓慢加入目标蛋白，室温1–2小时；

纯化

透析或凝胶过滤（如Sephadex G-25）去除游离修饰物；

酶法可选

OGT与UDP-GlcNAc共反应于20–37℃，酶浓度及底物比例优化以控制修饰度；

鉴定与表征

利用Western blot（抗-O-GlcNAc抗体）、MS（MALDI-TOF/LC-MS）确认修饰程度；

通过糖密度测定（如苯巴瑞蓝法）定量修饰位点。

4. 工艺节点控制

精确控制修饰摩尔比（1:1–1:10），避免过度修饰影响蛋白活性；

反应缓冲条件（pH、温度）维持蛋白稳定；

OGT酶活缓冲组件如Mg²⁺、UDP-GlcNAc浓度优化；

避光操作可防止糖的降解。

5. 应用方向

O-GlcNAc位点功能研究与信号通路解析；

用于PTM调控的蛋白组学分析；

与抗体共轭进行靶向诊断平台构建；

制备抗-O-GlcNAc疫苗候选抗原。 

规格：mg与g级别

产地：西安齐岳生物

用途：科研

以上资料由齐岳生物小编zhn提供，仅用于科研

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