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CY5.5-Streptavidin,花菁染料CY5.5标记链霉亲和素的技术核心与结构设计
发布时间:2025-07-28     作者:zhn   分享到:

CY5.5-Streptavidin(花菁染料CY5.5标记链霉亲和素)

中文名称:花菁染料 CY5.5 标记链霉亲和素

英文名称:Cy5.5-Streptavidin

一、背景概述

链霉亲和素(Streptavidin)是一种与生物素(Biotin)具有强非共价亲和力的四聚体蛋白,结合常数高达 10^(-14) mol/L。通过将近红外花菁染料 Cy5.5 标记至链霉亲和素上,构建出用于生物素化分子检测的荧光探针,广泛用于:

荧光免疫组化与原位杂交(FISH);

活体动物光学成像;

微阵列芯片检测;

荧光追踪与结合动力学研究;

荧光信号放大系统(如SAB技术)。

 

二、技术核心与结构设计

Cy5.5 是一种近红外荧光染料,激发峰约 675 nm,发射峰约 694–705 nm。其 NHS 酯活性基团可与蛋白分子上的游离赖氨酸残基(-NH₂)通过酰胺键偶联形成稳定的标记复合物。

分子结构图组成(简要)

Streptavidin(分子量约 60 kDa)

Cy5.5-NHS(1–3 个标记/分子)

标记参数:

*佳 DOL(Degree of Labeling)为 1.5–2.5;

过度标记将影响亲和力或荧光性能;

标签稳定,不影响与生物素结合活性。

 

三、合成路线概述

反应准备:将链霉亲和素溶于 pH 8.5 的碳酸盐缓冲液(如 0.1 M NaHCO₃);

加入Cy5.5-NHS:以1.5–5 eq 计量加入溶液;

反应条件:室温避光反应 30–60 分钟;

纯化:通过超滤(10 kDa 截留)或凝胶层析(如 Sephadex G-25)去除游离染料;

检测纯度:UV-Vis 分析 Cy5.5(λ=675 nm)与蛋白(λ=280 nm)比值,计算 DOL;

冻干储存:冻干后可长期保存于 -20°C 干燥环境中。

 

四、应用场景

肿瘤靶向示踪:与生物素修饰抗体或aptamer结合;

分子光学成像:用于小鼠体内肿瘤、淋巴结等组织示踪;

荧光染色:对组织切片中目标分子进行可视化检测;

蛋白芯片/ELISA扩展应用:替代HRP系统,获得高分辨率图像;

信号放大:与双生物素探针协同,增强靶点检测灵敏度。

 

五、定制参数

项目

支持说明

DOL 控制

可指定标记度(如 1.0、2.0、3.0)

缓冲体系

PBS、Tris、HEPES、NaHCO₃ 等均可适配

交联类型

NHS 酯类(默认),也可定制马来酰亚胺(适用于半胱氨酸标记)

染料替换

可改为 Cy5、Cy7、IRDye800、Alexa 系列

多功能耦联

可进一步加入 PEG 链、生物素或点击化学基团

交付形式

液体冻存或冻干粉末,附带说明书与标签图谱


产地:西安齐岳生物

用途:科研

以上资料由西安齐岳生物小编zhn提供,仅用于科研

CY5.5-Streptavidin

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