5-氨基乙酰丙酸（5-Aminolevulinic acid, 5-ALA） 是一种在生物体内合成血红素（heme）的前体分子，常用于光动力治疗（Photodynamic Therapy, PDT）中，尤其是用于癌症与皮肤病的靶向治疗。为了实现对其定位、定量、成像或靶向递送的研究目的，科研人员常对其进行荧光或亲和标记，其中生物素（Biotin）标记是一种常用的亲和标记策略。

以下为“5-ALA的生物素标记（Biotinylation of 5-Aminolevulinic Acid）”的专业介绍内容，包括化学策略、合成思路、应用方向及注意事项。

一、背景介绍

5-ALA 是一种结构简单的非蛋白质氨基酸，结构式为：

NH₂–CH₂–CO–CH₂–CH₂–COOH

它含有一个伯胺（NH₂）和一个羧酸（COOH）官能团，因此具备一定的化学修饰潜力。

在药物开发、细胞摄取研究、PDT机理探索等领域，对其进行生物素化修饰，有以下优点：

可用于与链霉亲和素（streptavidin）系统结合；

实现富集、捕获、靶向递送；

可间接接荧光探针、纳米载体、金属探针等；

适用于生物素-亲和素放大系统的传感检测。

二、化学修饰策略概述

1. 标记位点选择

5-ALA有两个主要可反应官能团：

位点 化学基团 可用于反应类型

α-氨基 -NH₂ 与NHS酯反应，形成酰胺键

γ-羧基 -COOH 与胺反应（如Biotin-NH₂），需活化处理

常用的标记策略是通过其α-氨基与**NHS-活化生物素（Biotin-NHS）**反应形成稳定的酰胺键。

三、合成路径示意

【方案一】5-ALA + Biotin-NHS

原理：

利用Biotin-NHS（N-Hydroxysuccinimide活性酯）与5-ALA分子上的伯胺进行酰胺键连接，反应条件温和，高效特异。

步骤简要：

取5-ALA溶于pH 7.4 PBS缓冲液；

缓慢滴加等摩尔的Biotin-NHS（溶于DMSO）；

轻微搅拌，室温反应2–4小时；

通过HPLC或凝胶层析去除副产物（NHS）；

得到纯化的 Biotin-5-ALA 产物。

特点：

反应条件温和，适合水相；

生成酰胺键稳定可靠；

生物素端可与SA或生物素体结合。

【方案二】5-ALA + Biotin via Spacer Arm

为了提高构象灵活性和生物识别效率，可引入PEG或六碳/十二碳柔性链作为间隔臂（Spacer Arm），比如使用：

Biotin-PEGₙ-NHS（n = 2~24）

Biotin-PEGₙ-Maleimide（用于后续硫醇反应）

该策略特别适合构建多价标记系统、表面偶联、生物传感平台。

四、产品性质与验证手段

项目 内容

分子名称 Biotin-5-Aminolevulinic Acid（Biotin-5-ALA）

连接方式 α-氨基与生物素羧基活性酯之间的酰胺键

可溶性 水、DMSO

稳定性 酰胺键稳定，-20°C保存可数月

质谱（MS）：分子量确认；

NMR（¹H，¹³C）：结构归属；

HPLC：纯度分析；

Streptavidin bead pull-down：生物素活性验证；

Western blot 或 ELISA（使用SA-HRP探针）：结合效应评估。

五、典型应用领域

1. PDT前体追踪

利用Biotin标记的5-ALA喂养肿瘤细胞后，使用荧光标记链霉亲和素（如SA-FITC）检测细胞摄取量，用于：

摄取效率评价；

药动学行为研究；

不同细胞对5-ALA代谢路径的差异分析。

2. 生物素化纳米递送系统构建

将Biotin-5-ALA修饰到纳米脂质体、PLGA纳米粒子表面，通过SA介导的偶联可形成多价聚集、增强肿瘤靶向性：

构建“5-ALA@Nano + Biotin-Streptavidin-Antibody”系统；

提高PpIX在肿瘤内的富集与光动力治疗效率。

3. 亲和捕获与纯化

通过SA磁珠或亲和层析柱，富集摄取了Biotin-5-ALA的细胞或组织样品，用于：

定量分析；

特异细胞富集；

后续RNA/蛋白质组分析。

4. 共价接枝平台材料

在生物材料（如水凝胶、聚合物、生物玻璃）上引入5-ALA功能位点，通过链霉亲和素中继系统连接体、蛋白、荧光探针，用于构建生物响应平台。

六、注意事项

问题 建议

5-ALA在水溶液中易自缩合 现配现用，低温避光储存

生物素-5-ALA可能影响5-ALA代谢生成PpIX 注意浓度控制，做对照组验证

Biotin-NHS易水解失活 低温干燥储存，用前新鲜配置

SA-FITC等结合后信号不强 加入PEG-linker 或采用多价聚合形式增强信号

七、结语

5-ALA的生物素标记为研究其生物分布、细胞摄取、靶向递送及PDT作用机制提供了精确、灵活的工具。通过与链霉亲和素-荧光探针、磁性材料、体药物等的结合，构建出可视化、可操控、智能化的多功能平台。随着生物正交化学、纳米技术和智能药物载体的发展，Biotin-5-ALA将为癌症诊疗一体化、药物机制揭示、生物材料构建等研究领域带来广阔前景。

厂家:西安齐岳生物科技有限公司

用途:科研

温馨提醒:仅供科研，不能用于人体实验!