一、荧光标记酶简要介绍

荧光标记酶是通过共价偶联等技术将荧光基团与酶分子结合形成的功能复合物，兼具酶的生物催化活性与荧光基团的示踪特性，可实现酶在生物体系中的定位、动态追踪及活性定量分析，广泛应用于生命科学研究、药物筛选、临床检测等领域。其核心优势在于将 “酶的特异性功能” 与 “荧光的高灵敏度检测” 相结合，解决了传统酶学研究中 “不可视化” 的痛点。

二、西安齐岳生物荧光标记酶定制服务详情

（一）定制服务核心方向

西安齐岳生物提供全方位荧光标记酶定制，涵盖荧光基团选型、酶分子筛选、标记工艺优化、产物纯化鉴定全流程，可根据客户需求实现 “荧光 - 酶” 组合定制、标记位点精准控制、活性保留率优化等个性化服务。

（二）可选荧光种类及特性

（三）可选酶类型及应用领域

（四）荧光标记核心技术与工艺

标记反应机制

氨基偶联：荧光基团（如 FITC、Cy 系列）通过异硫氰酸酯或 NHS 酯活化，与酶分子表面赖氨酸残基的 ε- 氨基形成稳定共价键（硫脲键 / 酰胺键），反应条件温和（pH 7.0-9.0），避免酶活性中心破坏。

巯基偶联：针对含半胱氨酸的酶，荧光基团通过马来酰亚胺活化，与巯基（-SH）特异性偶联，标记位点更精准。

FRET 配对标记：采用 “供体 - 受体” 荧光对（如 FAM-TAMRA、MCA-DNP），标记于酶的底物结合区域，通过荧光淬灭 / 恢复实现酶活性实时监测。

关键工艺步骤

预处理：酶分子纯度纯化（纯度≥95%）、缓冲液置换（去除干扰基团）；

标记反应：精准控制荧光基团与酶的摩尔比（1:1 至 1:10）、反应温度（4-25℃）、反应时间（2-24h），确保标记效率与活性保留；

纯化鉴定：通过凝胶过滤层析 / 离子交换层析去除游离荧光基团，经 SDS-PAGE 验证纯度、荧光光谱检测标记效率、酶活性测定验证功能（活性保留率≥80%）；

稳定性优化：添加保护剂（如 BSA、甘油），确保产物在 - 20℃下避光储存 6 个月以上稳定。

（五）定制服务汇总表

三、西安齐岳生物定制案例（图文结合）

案例 1：FITC 标记溶菌酶（FITC-Lysozyme）

（1）定制需求

荧光基团：FITC

酶来源：蛋清溶菌酶（纯度≥98%）

标记比例：1:2（FITC: 溶菌酶）

应用场景：细菌结合位点追踪及抗菌活性检测

（2）技术参数与结果

指标 检测结果

荧光特性：激发峰 492nm，发射峰 520nm

酶活性：比活性≥20000 U/mg（标记前 22000 U/mg，保留率 91%）

纯度鉴定：SDS-PAGE 电泳单一条带，分子量约 14.3kDa

（3）应用效果

标记后的 FITC-溶菌酶可通过荧光显微镜直观观察到与大肠杆菌的结合过程（黄绿色荧光聚集于细菌表面），成功应用于 “抗菌肽协同溶菌酶作用机制” 研究。

案例2：Cy5标记的辅酶NADH

某科研单位为开展线粒体代谢通路荧光成像研究，需定制 Cy5标记的辅酶NADH（β- 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸），核心要求包括：荧光标记位点不影响辅酶生物活性、标记物在生理 pH 下稳定、荧光量子产率≥0.25。

接到需求后，技术团队先通过分子模拟筛选标记位点，合成阶段采用固相合成法，通过琥珀酰亚胺酯活化 Cy5，与修饰后的辅酶进行酰胺化反应。经反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化，目标产物纯度达 98.6%。

成品验证显示，Cy5 - 辅酶 NADH 的荧光激发波长 646nm、发射波长 662nm，量子产率 0.28，满足客户要求；体外酶促反应实验证明，其与乳酸脱氢酶的结合活性保留率达 92%，可有效参与代谢循环。

案例3：Cy5标记荧光素酶（Cy5-FLuc）

（1）定制需求

荧光基团：Cy5

酶类型：萤火虫荧光素酶（FLuc）

定制要求：保留 ATP 依赖性发光活性，用于活体肿瘤成像

（2）技术参数与结果

发光特性：生物发光波长 560nm，荧光发射波长 670nm

活体成像效果：小鼠皮下肿瘤注射后，15 分钟可检测到强荧光信号

稳定性：-20℃储存 3 个月

（3）应用价值

该定制产物成功用于 “肿瘤靶向治疗药物筛选”，通过同时检测 FLuc 生物发光（酶活性）和 Cy5 荧光（定位），实现治疗效果的双重验证。

三、西安齐岳生物荧光标记酶核心优势

1、精准标记与活性保留双保障：

采用定点偶联技术（氨基 / 巯基特异性结合），结合 “低温柔性反应体系”，可精准控制标记位点（避开酶活性中心），确保标记后酶活性保留率≥80%，远高于行业平均水平（60%-70%）；通过优化荧光基团与酶的摩尔比，平衡示踪灵敏度与生物功能稳定性。

2、全光谱荧光与酶库覆盖：

涵盖紫外、可见、近红外全波段荧光基团（FITC/Cy 系列 / ICG 等），适配从体外检测到活体成像的多场景需求；酶库包含蛋白酶、荧光素酶、功能酶等 30 + 类，支持常规酶、稀有酶及重组酶定制，可实现 “任意荧光 - 任意酶” 组合匹配。

3、定制化与规模化兼具：提供从 100μg 到 10mg 的多规格交付，满足实验室研发与工业化生产需求；支持个性化参数调整（如标记比例、间隔臂长度、缓冲液类型），

可根据客户应用场景（如 FRET 实验、活体成像、试剂盒开发）优化产物性能。

4、技术支持与方案共创：

专业技术团队提供全流程咨询，包括荧光 - 酶组合选型、实验方案设计、数据解读；针对复杂需求（如双荧光标记、酶抑制剂联用）可提供定制化技术方案，助力客户高效推进研究。

四、荧光标记酶相关参考文献

1、基于单荧光标记 DNA 底物的荧光生成型聚合酶、核酸内切酶和连接酶检测

英文名：Fluorogenic polymerase, endonuclease, and ligase assays based on DNA substrates labeled with a single fluorophore

链接：https://www.researchgate.net/publication/49819743

Fluorogenic_polymerase_endonuclease_and_ligase_assays_based_on_DNA_substrates_labeled_with_a_single_fluorophore

主要内容：

开发了单荧光标记底物技术，用于核酸修饰酶（聚合酶、连接酶等）的活性检测，提出荧光标记酶的简化设计方案，降低制备成本并拓宽应用场景，为体外酶学检测提供新方法。

2、双荧光素酶报告基因实验在基因转录调控研究中的应用

英文名：Application of dual-luciferase reporter assay in the study of gene transcriptional regulation

链接：https://www.genecreate.cn/industry_news/3389.html

主要内容：

系统阐述了萤火虫荧光素酶（FLuc）与海肾荧光素酶（RLuc）的双标记技术，验证了荧光标记酶在启动子活性分析、蛋白互作检测中的高灵敏度与定量准确性，对比了双荧光系统与传统方法的优势。

3、荧光素酶标记在活细胞动态追踪与肿瘤成像中的研究进展

英文名：Research progress of luciferase labeling in live cell dynamic tracking and tumor imaging

链接：https://www.163.com/dy/article/KH074VGU05568KW1.html

主要内容：

结合 Cre-loxP 重组酶系统，探讨了荧光素酶标记酶在细胞谱系示踪、肿瘤活体成像中的应用，重点分析了时间特异性标记技术的优势，为肿瘤发生发展机制研究提供工具支持。

4、6 - 羧基二乙酸荧光素标记酯酶在活细胞分选与增殖追踪中的应用

英文名：Application of 6-CFDA labeled esterase in live cell sorting and proliferation tracking

链接：http://m.toutiao.com/group/7564685110826549779/

主要内容：

报道了 6-CFDA 荧光标记酯酶的活细胞特异性标记技术，验证了其低毒性、高稳定性的特点，可实现活细胞分选、增殖代数分析及高通量药物毒性筛选，荧光信号维持时间达 24-48 小时。

5、荧光共振能量转移（FRET）技术在蛋白酶活性实时监测中的应用

英文名：Application of FRET technology in real-time monitoring of protease activity

链接：http://m.toutiao.com/group/7554211843481354779/

主要内容：

利用 FAM-TAMRA 荧光对标记蛋白酶，构建了基于 FRET 的酶活性实时检测体系，实现了蛋白酶水解过程的动态追踪，为酶抑制剂筛选及酶动力学研究提供了高效工具。

五、荧光标记酶相关产品

FITC 标记木瓜蛋白酶（FITC-Papain）

Cy3 标记溶菌酶（Cy3-Lysozyme）

Cy5 标记萤火虫荧光素酶（Cy5-Firefly Luciferase）

ICG 标记辣根过氧化物酶（ICG-HRP）

FAM 标记胰蛋白酶（FAM-Trypsin）

TAMRA 标记乙酰胆碱酯酶（TAMRA-Acetylcholinesterase）

Cy5.5 标记海肾荧光素酶（Cy5.5-Renilla Luciferase）

MCA 标记脲酶（MCA-Urease）

FITC 标记纳米荧光素酶（FITC-NanoLuc）

Cy3 标记纤维素酶（Cy3-Cellulase）

FAM 标记碱性磷酸酶（FAM-Alkaline Phosphatase）

ICG 标记葡萄糖氧化酶（ICG-Glucose Oxidase）

TAMRA 标记凝血酶（TAMRA-Thrombin）

Cy5 标记 β- 半乳糖苷酶（Cy5-β-Galactosidase）

FITC 标记胆碱酯酶（FITC-Cholinesterase）

Cy5.5 标记过氧化氢酶（Cy5.5-Catalase）

MCA 标记弹性蛋白酶（MCA-Elastase）

FAM 标记天冬酰胺酶（FAM-Asparaginase）

Cy3 标记脂肪酶（Cy3-Lipase）

ICG 标记超氧化物歧化酶（ICG-SOD）