5-FAM-NH₂,全称为5-氨基荧光素(5-Isomer of Fluorescein Amine),是一种结构功能活性高的荧光素类染料分子。它是荧光素(Fluorescein)分子在5位引入一个伯胺(—NH₂)基团而形成的衍生物。
英文名 N-(6-aminohexyl)-3',6'-dihydroxy-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxamide
CAS号 138589-19-2
分子量 474.5
分子式 C27H26N2O6
熔点 N/A
化学特性与功能位点
伯胺基团(—NH₂)
该基团在碱性条件下容易与羧基类分子反应,形成稳定的酰胺键。它也是核酸或蛋白质共价标记反应中重要的连接位点。
水溶性与极性结构
荧光素结构整体偏亲水,利于在水相中操作,与生物分子具有良好的兼容性,不容易沉淀。
官能团改造潜力
可进一步改造为FAM NHS、FAM maleimide、FAM azide等活性形式,拓展其应用范围至多种偶联体系。
四、应用领域
1. 寡核苷酸(DNA/RNA)标记
5-FAM-NH₂是寡核苷酸5'端或3'端标记的理想荧光染料,可通过与磷酸化核苷酸形成酰胺键,赋予寡核苷酸荧光功能,用于实时定量PCR(qPCR)、探针杂交、电泳成像等。
2. 蛋白质和抗体修饰
可通过交联剂(如EDC/NHS)将FAM-NH₂与抗体、酶或其他蛋白质的羧基反应,制备荧光标记蛋白,用于免疫荧光、ELISA、流式细胞术等。
3. 荧光探针设计
FAM作为荧光团,常被用于构建FRET探针、分子开关、金属离子检测探针等,利用其光谱变化响应目标分子的结合或环境变化。
4. 纳米颗粒和材料表面修饰
FAM-NH₂可用于功能性材料如硅胶、聚合物微球、纳米粒表面标记,实现荧光成像、靶向递送及可视化检测功能。
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