FITC-TSA,即荧光素标记酪胺(Fluorescein Tyramide),是一种高灵敏度信号放大染料,用于TSA(Tyramide Signal Amplification)系统。其化学名称为N-(3-Hydroxyphenethyl)fluorescein-5-carboxamide,分子中同时包含了具有荧光发射功能的FITC(荧光素异硫氰酸酯)部分和一个酪胺(tyramine)结构单元。通过与过氧化物酶(如HRP)协同使用,FITC-TSA可用于信号增强成像、免疫组织化学、原位杂交和免疫印迹等生物检测方法中。
英文名 Fluorescein tyramide
CAS号 210236-90-1
分子量 495.49
分子式 C29H21NO7
熔点 N/A
结构与功能设计
FITC-TSA结构主要由两个功能域构成:
FITC荧光素部分
负责荧光发射,是广泛使用的绿色荧光染料。它具有高量子产率、良好的光稳定性和标准激发/发射波长,适用于绝大多数荧光显微镜系统。
Tyramide结构(酪胺)
酪胺是信号放大反应中的核心反应基团。在存在HRP(辣根过氧化物酶)和过氧化氢(H₂O₂)的条件下,酪胺基团被催化活化为高反应性的自由基,并迅速与周围的酪氨酸残基发生共价键合,将FITC永久性沉积在靶点周围。
应用领域
1. 免疫组化(IHC)
FITC-TSA广泛用于检测组织切片中微量抗原的表达。由于其高信号放大能力,能在传统一抗二抗体系之外显著增强荧光信号,使得弱表达或稀有标志物得以清晰可视化。
2. 原位杂交(ISH)
在检测mRNA或基因扩增信号时,FITC-TSA常与HRP标记的探针体系配合使用,使得微弱信号在细胞内被清晰放大。
3. 多重荧光标记
通过不同荧光TSA衍生物(如FITC、Cy3、Cy5等)配合使用,可以在同一组织切片中同时检测多个靶点,提高空间解析能力。
4. 流式细胞术增强染色
在多参数流式分析中,FITC-TSA可用于对表达水平较低的细胞表面或胞内抗原的放大染色,提高检测分辨率。
5. 免疫印迹(Western Blot)
当蛋白表达量较低,无法用常规抗体染色法检测时,使用TSA增强策略能实现高灵敏度的条带显影。
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