齐墩果酸(Oleanolic Acid, OA)的荧光标记技术
1. 荧光标记原理与策略
齐墩果酸分子含有羧基、烯烃结构,可通过“羧基–氨基”或“羧基–羟基”形成酯、酰胺键与荧光染料偶联。常用染料包括FITC(异硫氰酸荧光素)、Cy5、Cy5.5、Alexa Fluor 和 DyLight 系列。
a. FITC标记
化学逻辑:OA–OH(酯化)或OA–COOH(酰胺)与FITC异硫氰酸基反应,标记后荧光在激发 ~490 nm,发射 ~520 nm。
特点:成本低、常规显微镜通用,荧光强度适中,但光漂白较明显 。
b. Cy5/Cy5.5标记
方案:利用Cy NHS酯与OA的羧基反应生成Cy5-OA/Cy5.5-OA。
优势:近红外激发(≈650–700 nm)、发射(≈670–720 nm),背景低、穿透深 。
应用实例:Cy5-OA用于小鼠原位肿瘤成像,在肿瘤部位荧光信号明显高于肝脏,适合实时监测药物富集 。
c. 其他染料
Alexa Fluor 647、DyLight 650/680 可用于多通道成像。
标签效率高、光稳定性优;需根据仪器适配激发源。
2. 实验流程与注意事项
合成条件:OA与荧光NHS酯(Cy5、FITC等)在干燥DMSO或DMF中,加入碱性助剂(如TEA或DIPEA),室温2–4 h。
纯化步骤:反应后用硅胶柱或半制备HPLC纯化,确认单峰。
表征确认:
MS 或 HR-MS 确认分子量变化;
荧光光谱检测标记效率;
核磁确认关键官能团的结合(酰胺或酯键形成)。
生物应用:细胞/动物实验前确保去除游离染料,并检测细胞毒性(MTT、CCK-8)。
3. 应用示例
细胞成像:Cy5-OA可用于共聚焦显微镜观察细胞内定位,如共定位线粒体、内质网或脂滴 。
体内成像:通过小动物活体荧光成像仪,可用于评估药物分布及积累。术中导航、肿瘤动态监测具有潜力 。
代谢机制研究:荧光强度变化反映OA释放、代谢情况。
用途:仅应用于科研,不能用于人体实验!
以上资料由小编zhn提供,仅用于科研
关于我们:
西安齐岳生物科技有限公司专注于生物医药领域,提供多种科研试剂和材料。主要产品包括化学试剂、生物试剂、纳米材料、前药及载体材料,以及各类荧光标记和分子探针。产品广泛应用于药物研发、分子成像、智能药物递送和靶向治疗等领域。公司致力于为科研机构和医药企业提供专业、可靠的解决方案,推动生命科学研究和医药产业的发展。
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